Gram stain atau juga dikenal sebagai warna Gram adalah nama yang diberikan untuk jenis pewarnaan diferensial digunakan dalam bidang bakteriologi untuk memvisualisasikan bakteri, terutama di sampel klinis. Nama pewarnaan ini diambil dari ahli bakteriologi Denmark Christian Gram, yang bertanggung jawab untuk mengembangkan teknik ini pada tahun 1884. Tujuan utama Gram adalah mendapatkan tes yang memungkinkannya untuk membedakan berbagai kelompok bakteri untuk mempelajarinya dan menguraikan klasifikasi mereka. Eksperimen Gran ternyata sangat sukses dan dia dengan cepat menjadikan dirinya sebagai salah satu teknik utama digunakan untuk mempelajari bakteri, karena memungkinkan mereka untuk dengan cepat dan efektif diidentifikasi dalam suatu infeksi dan untuk memilih antibiotik yang paling tepat untuk mengobati infeksi tersebut.
Adapun prosedur untuk melakukan pewarnaan adalah sebagai berikut: pertama mengambil sample bakteri untuk diwarnai, kemudian dengan swab dioleskan pada slide kemudian harus dibiarkan mengering pada suhu ruangan atau, jika tidak, gunakan korek api, berhati-hati agar tidak membakar bakteri. Setelah itu sampel harus ditempelkan pada slide menggunakan methanol selama kurang lebih 1 menit.
Selanjutnya ditempatkan warna dari violet gentian pada slide dan diamkan selama 1 menit. Yang penting, pewarna ini memiliki kemampuan untuk mengatasi semua jenis dinding bakteri dan itulah sebabnya dapat mewarnai bakteri Gram positif dan negatif. Setelah itu sampel dibilas dengan air kemudian ditambahkan Lugol, sehingga zat tersebut menutupi seluruh sampel dan menunggu selama satu menit. Lugol adalah senyawa yang sebagian besar terdiri dari yodium, yang dalam hal ini bertanggung jawab untuk mengikat pewarna gentian violet ke sampel.
Setelah langkah-langkah yang dijelaskan di atas, slide harus dicuci dengan campuran alkohol dan aseton selama kurang lebih 30 hari, pada langkah ini, pewarnaan Gram benar-benar berakhir, hal ini karena campuran alkohol dan aseton adalah bertanggung jawab untuk melarutkan kompleks lugol dan gentian violet.
